Plasmide CRISPR d'Activation (m) Ferroportin-1: sc-424774-ACT

Slc40a1 code la ferroportine-1, principal exportateur cellulaire du fer, qui contrôle l’efflux de fer depuis les entérocytes, les macrophages et les hépatocytes afin de maintenir la disponibilité systémique en fer. L’activité de la ferroportine-1 est étroitement régulée par l’axe hepcidine–ferroportine, dans lequel la liaison de l’hepcidine déclenche l’internalisation et la dégradation de la ferroportine, couplant ainsi l’export du fer à des signaux inflammatoires et nutritionnels. Par ces mécanismes, Slc40a1 influence l’érythropoïèse, les réponses au stress oxydatif et la gestion du fer par les macrophages, reliant le trafic du fer à la signalisation immunitaire et à l’homéostasie métabolique. Une exportation médiée par la ferroportine dérégulée est largement étudiée dans des modèles de surcharge en fer, d’anémie de l’inflammation et d’interactions hôte–pathogène, où la restriction en fer façonne l’aptitude microbienne et les lésions tissulaires.

Ferroportin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Slc40a1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ferroportin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Slc40a1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Slc40a1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ferroportin-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Slc40a1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ferroportin-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ferroportin-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Slc40a1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.