Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ferroportin-1: sc-400872-ACT

SLC40A1 code la ferroportine-1, principal exportateur cellulaire de fer, qui assure l’efflux du fer depuis les entérocytes, les macrophages et les hépatocytes afin de maintenir l’homéostasie systémique du fer. L’activité de la ferroportine-1 est étroitement régulée par l’axe de l’hepcidine : la liaison de l’hepcidine favorise l’internalisation du transporteur puis sa dégradation lysosomale, reliant ainsi la disponibilité en fer aux signaux inflammatoires et métaboliques. En contrôlant le trafic du fer, SLC40A1 influence l’équilibre rédox, la fonction mitochondriale et la sensibilité à la ferroptose via la dynamique du pool de fer labile. Une expression ou une fonction dérégulée de la ferroportine-1 est associée à des phénotypes de surcharge en fer ou, au contraire, de restriction en fer, et est pertinente pour les études sur l’anémie, les troubles héréditaires du métabolisme du fer, l’hypoferremie associée aux infections, ainsi que la gestion du fer par les macrophages dans des microenvironnements inflammatoires.

Ferroportin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC40A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ferroportin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC40A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC40A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ferroportin-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC40A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ferroportin-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ferroportin-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC40A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.