Plásmido Doble Nickase (h) Ferrochelatase: sc-402043-NIC

El gen humano **FECH** codifica la **ferroquelatasa**, la enzima terminal de la biosíntesis del hemo que cataliza la inserción de hierro ferroso en la protoporfirina IX para formar hemo en la matriz mitocondrial. Esta actividad sostiene el metabolismo oxidativo al aportar grupos prostéticos de hemo para la hemoglobina, la mioglobina, los citocromos, las catalasas y las sintasas de óxido nítrico. La función de FECH se integra con el manejo mitocondrial del hierro, el metabolismo de las porfirinas y la homeostasis redox, lo que la convierte en un componente central de la respiración celular y del control de las especies reactivas de oxígeno. La desregulación de FECH se asocia con la acumulación de porfirinas y fenotipos de deficiencia de hemo, incluidas porfirias hereditarias como la **protoporfiria eritropoyética**, y se estudia en contextos de anemia, disfunción mitocondrial y estrés celular asociado a la fotosensibilidad.

Ferrochelatase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FECH en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FECH. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FECH. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FECH alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.