Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
ferritin heavy chain Double Nickase Plasmid (h): sc-418152-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ferritin heavy chain Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ferritin heavy chain Double-Nickase-Plasmid (h) und ferritin heavy chain Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FTH1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ferritin heavy chain: sc-376594
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ferritin heavy chain Double Nickase Plasmid (h) | sc-418152-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ferritin heavy chain Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418152-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FTH1 kodiert die humane Ferritin-Schwerkette, eine ferroxidaseaktive Untereinheit, die Fe²⁺ zu Fe³⁺ oxidiert, um eine sichere Eisen-Sequestrierung in Ferritin-Hüllen zu fördern und die intrazelluläre Eisenhomöostase aufrechtzuerhalten. Durch das Puffern von labilen Eisenpools und die Begrenzung der Fenton-Chemie beeinflusst FTH1 oxidativen Stress, die mitochondriale Funktion sowie eisenabhängige Zelltodprogramme wie die Ferroptose. Die Expression von FTH1 wird über die Signalachse aus Iron-Responsive-Element (IRE) und Iron-Regulatory-Proteins (IRP) reguliert und ist über den Autophagie-abhängigen Ferritinabbau (Ferritinophagie) via NCOA4 mit der Eisenmobilisierung verknüpft. Eine gestörte Ferritinbiologie und veränderte FTH1-Spiegel werden häufig mit Entzündung, Neurodegeneration, anämieassoziierten Zuständen und tumorassoziiertem metabolischem Remodeling in Verbindung gebracht, was FTH1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien des Eisenstoffwechsels macht.
ferritin heavy chain Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FTH1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FTH1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FTH1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FTH1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.