FEN-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403168

Descripción general

FEN1 codifica la endonucleasa de solapa 1 (FEN-1), una nucleasa específica de estructura que escinde intermediarios de solapa 5′ durante la maduración de los fragmentos de Okazaki y la reparación por escisión de bases de parche largo. FEN-1 se coordina con PCNA y las ADN polimerasas para mantener la fidelidad de la replicación del ADN, procesar horquillas de replicación detenidas y resolver estructuras secundarias del ADN que pueden desencadenar inestabilidad genómica. A través de sus funciones en las respuestas al estrés replicativo, la elección de vías de reparación y el mantenimiento de la integridad cromosómica, la alteración de la función de FEN1 se asocia con la acumulación de mutaciones y con firmas relacionadas con la biología del cáncer y la sensibilidad al daño en el ADN. Por ello, FEN-1 se utiliza ampliamente como punto de entrada mecanístico para estudiar redes de reparación del ADN, el procesamiento acoplado a la replicación y la señalización de puntos de control.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FEN-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FEN1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FEN1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FEN1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FEN-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FEN1 para la investigación de la señalización de FEN-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FEN1 críticos para la función de FEN-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FEN1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FEN-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FEN-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FEN1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FEN-1 (h) y el plásmido HDR FEN-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FEN1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FEN1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.