FBXO25 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405092-ACT

O FBXO25 humano codifica uma proteína do tipo F-box que atua como componente de reconhecimento de substratos dos complexos de ligase E3 de ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–F-box), ajudando a direcionar proteínas específicas para ubiquitinação e degradação dependente do proteassoma. Por meio da degradação proteica regulada, o FBXO25 contribui para o controle da progressão do ciclo celular, da sinalização responsiva ao estresse e da manutenção da proteostase. Alterações na sinalização de ubiquitina mediada por SCF podem remodelar programas transcricionais e a homeostase celular, associando atividade alterada de proteínas F-box a fenótipos relevantes para doenças na biologia do câncer e na neurobiologia. Assim, o FBXO25 é de interesse para investigar a organização da via ubiquitina–proteassoma e seus efeitos a jusante sobre sinalização e expressão gênica.

FBXO25 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FBXO25 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FBXO25 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FBXO25 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FBXO25, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FBXO25. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FBXO25 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FBXO25 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FBXO25 em células tumorais com expressão de FBXO25 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.