FBL8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406696

Übersicht

FBXL8 (FBL8) kodiert ein F-Box-Protein, dem eine Funktion als Substraterkennungskomponente von SCF-(SKP1–CUL1–F-Box)-E3-Ubiquitin-Ligase-Komplexen vorhergesagt wird und das damit den ubiquitinabhängigen Proteinabbau unterstützt. Durch die selektive Ubiquitinierung von Zielproteinen kann FBXL8 Proteostase-Programme beeinflussen, die den Zellzyklusverlauf, die Signaltransduktion und Stressantworten prägen. Eine Störung der F-Box-vermittelten Ubiquitin-Ligase-Aktivität kann die Checkpoint-Kontrolle sowie die Dynamik von Signalwegen verändern, die mit onkogener Transformation und anderen proliferativen Erkrankungen verknüpft sind. FBXL8 ist daher ein nützlicher Knotenpunkt, um zu untersuchen, wie zielgerichteter Proteinabbau mit der zellulären Homöostase und krankheitsassoziierten Signalnetzwerken zusammenwirkt.

Das FBL8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FBXL8-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FBXL8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FBXL8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FBL8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FBXL8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FBL8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FBXL8-Exone abzielen, die für die FBL8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FBXL8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FBL8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FBL8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FBXL8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FBL8 HDR-Plasmid (h) und FBL8 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FBXL8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FBXL8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.