FBL4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-435345

Descripción general

Fbxl4 codifica una proteína con dominio F-box y repeticiones ricas en leucina que actúa como componente de reconocimiento de sustratos de los complejos de ligasa E3 de ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–F-box), ayudando a dirigir proteínas específicas hacia su degradación dependiente de ubiquitina. Mediante una proteostasis regulada, FBXL4 puede influir en la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés y la dinámica más amplia del sistema ubiquitina–proteasoma. En ratón, la alteración de la actividad de FBXL4 se ha vinculado con la homeostasis mitocondrial y el metabolismo energético celular, lo que respalda su relevancia para estudios de disfunción mitocondrial y fenotipos de enfermedad multisistémica asociados. Por tanto, Fbxl4 es una diana útil para analizar cómo el control de calidad mediado por ubiquitina se integra con las vías metabólicas y el mantenimiento de orgánulos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FBL4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Fbxl4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Fbxl4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Fbxl4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FBL4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Fbxl4 para la investigación de la señalización de FBL4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Fbxl4 críticos para la función de FBL4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Fbxl4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FBL4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido FBL4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Fbxl4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FBL4 (m) y el plásmido HDR FBL4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Fbxl4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Fbxl4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.