Plasmide Double Nickase (h) FBL16: sc-414575-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) FBL16 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FBL16 Double Nickase (h) et le plasmide FBL16 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FBXL16. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) FBL16 | sc-414575-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) FBL16 | sc-414575-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FBXL16 (FBL16) code une protéine à domaine F-box, supposée agir comme composant de reconnaissance des substrats au sein des complexes ligase E3 ubiquitine SCF (SKP1–CUL1–RBX1), influençant ainsi le renouvellement protéasomal, dépendant de l’ubiquitine, des protéines cibles. Par ce rôle, FBXL16 est associée à la régulation de l’homéostasie protéique et des sorties de signalisation cellulaire qui dépendent de la dégradation rapide des effecteurs de voie. La modulation de l’activité SCF/F-box peut affecter la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et les programmes transcriptionnels en modifiant la stabilité de protéines régulatrices. Le dérèglement des composants de la voie ubiquitine–protéasome, y compris les adaptateurs F-box, est fréquemment associé à des états de signalisation altérés observés dans le cancer et d’autres troubles caractérisés par un déséquilibre de la protéostasie.
FBL16 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FBXL16 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FBXL16. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FBXL16. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FBXL16.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.