Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Fatso Double Nickase Plasmid (m): sc-424024-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Fatso Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Fatso Double-Nickase-Plasmid (m) und Fatso Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Fto abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Fatso: sc-271713
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Fatso Double Nickase Plasmid (m) | sc-424024-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Fatso Double Nickase Plasmid (m2) | sc-424024-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Fto** kodiert das Protein **Fatso**, eine Fe(II)/2‑Oxoglutarat‑abhängige Dioxygenase, die als RNA‑Demethylase wirkt und bevorzugt **N6‑Methyladenosin (m6A)** sowie verwandte methylierte Adenosine demethyliert. Durch die Modulation des RNA‑Methylierungsstatus beeinflusst Fatso Spleißen, Stabilität, Translation und Abbau von mRNA und formt damit Genexpressionsprogramme, die die Energiebilanz und Zellzustandsübergänge steuern. Die Fto‑Aktivität ist in Nährstoffsensorik‑ und Stoffwechsel‑Signalnetzwerke eingebunden, darunter Signalwege, die mit Adipogenese und mitochondrialer Funktion verknüpft sind. Eine fehlregulierte Fto‑Expression oder ‑Funktion wurde mit adipositasassoziierten Merkmalen und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, weshalb Fto ein häufig genutztes Ziel in Studien zur epitranskriptomischen Regulation und zu stoffwechselgetriebenen Krankheitsmechanismen ist.
Fatso Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Fto-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Fto abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Fto-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Fto-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.