Particules Lentivirales d'Activation (h) FAT10: sc-402682-LAC

Le gène humain UBD code FAT10 (également appelé ubiquitine D), un modificateur de type ubiquitine fortement induit par des signaux pro-inflammatoires tels que le TNF-α et l’IFN-γ. FAT10 se conjugue de façon covalente aux protéines substrats et favorise leur reconnaissance par le protéasome 26S selon un mécanisme largement indépendant de l’ubiquitine, reliant ainsi la signalisation immunitaire au renouvellement protéique régulé. Par ses effets sur la protéostasie, le contrôle du cycle cellulaire et les réponses au stress, FAT10 influence des voies incluant la dégradation protéasomale et les programmes transcriptionnels inflammatoires. Une expression dérégulée d’UBD/FAT10 a été associée à l’inflammation chronique et à des phénotypes oncogéniques, ce qui en fait un point d’entrée moléculaire pertinent pour étudier les interfaces inflammation–cancer et le remodelage du protéome induit par l’immunité.

Les particules d'activation lentivirales FAT10 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de UBD dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales FAT10 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription UBD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de FAT10. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif UBD ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.