FAT1 Plasmide Double Nickase (m): sc-420291-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FAT1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FAT1 Double Nickase Plasmid (m) e il FAT1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Fat1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FAT1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-420291-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Fat1 codifica FAT1, una caderina atipica che regola l’adesione cellula‑cellula, la polarità e la migrazione direzionale coordinando la dinamica del citoscheletro di actina e i componenti della segnalazione Hippo. FAT1 contribuisce alla polarità planare delle cellule e alla morfogenesi tissutale influenzando l’organizzazione delle giunzioni e segnali associati alla membrana che modellano l’architettura epiteliale. L’alterazione dei programmi di adesione e polarità dipendenti da FAT1 è stata collegata ad anomalie dello sviluppo e a un controllo della crescita modificato in contesti rilevanti per la malattia, rendendolo un nodo utile per studiare come reti meccaniche e di segnalazione si integrino nel governare l’integrità dei tessuti. Nei modelli murini e nei sistemi cellulari, FAT1 rappresenta un punto di accesso sperimentalmente trattabile per indagare le vie che collegano caderine giunzionali, rimodellamento del citoscheletro e regolazione della proliferazione dipendente dal contatto.
FAT1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Fat1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Fat1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Fat1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Fat1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.