FANCD2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400445-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FANCD2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FANCD2 Double-Nickase-Plasmid (h) und FANCD2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FANCD2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FANCD2: sc-20022
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FANCD2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400445-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FANCD2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400445-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FANCD2 kodiert einen zentralen Effektor des Fanconi-Anämie-(FA-)Reparaturwegs für DNA-Interstrangvernetzungen und koordiniert die Aufrechterhaltung des Genoms während der S-Phase. Bei Replikationsstress und DNA-Schäden wird FANCD2 monoubiquitinyliert und zusammen mit FANCI an das Chromatin rekrutiert, wodurch die nukleolytische Prozessierung, die Translesionssynthese und die homologe Rekombination über Crosstalk mit BRCA-assoziierten Reparaturfaktoren gefördert werden. Die Funktion von FANCD2 verknüpft die Stabilität der Replikationsgabel, Checkpoint-Signalgebung und die Unterdrückung chromosomaler Brüche und unterstützt so die Zellviabilität unter endogenem und exogenem genotoxischem Stress. Eine Störung oder beeinträchtigte Regulation von FANCD2 ist mit der Fanconi-Anämie assoziiert und wird im Kontext von Phänotypen genomischer Instabilität, die für die Krebsbiologie und DNA-Reparaturerkrankungen relevant sind, umfassend untersucht.
FANCD2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FANCD2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FANCD2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FANCD2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FANCD2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.