FAM20B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-411386-ACT

FAM20B kodiert eine im Golgi-Apparat lokalisierte Glykosaminoglykan-(GAG)-Xylosylkinase, die den Xyloserest innerhalb der für die Proteoglykanbiosynthese erforderlichen Tetrasaccharid-Linkerregion phosphoryliert. Durch die Regulation von Initiation und Elongation von Heparansulfat- sowie Chondroitin-/Dermatansulfat-Ketten beeinflusst FAM20B die Organisation der extrazellulären Matrix, die Zell-Matrix-Adhäsion und die Verteilung von Wachstumsfaktoren, einschließlich von Signalachsen wie FGF, WNT und BMP. Eine veränderte Proteoglykan-/GAG-Homöostase wird mit Defekten der Skelettentwicklung, einer beeinträchtigten Integrität des Bindegewebes und einer Dysregulation zellulärer Signalprogramme in Verbindung gebracht, die für das Remodeling des Tumormikroenvironments relevant sind. Daher wird FAM20B in Signalwegen untersucht, die matrixabhängige Proliferation, Migration und die Morphogenese während der Entwicklung steuern.

FAM20B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FAM20B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FAM20B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FAM20B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FAM20B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FAM20B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FAM20B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FAM20B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FAM20B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FAM20B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.