FAM198B Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-409269-LAC

FAM198B codifica una proteina secreta o localizzata nel lume, implicata nella regolazione della comunicazione cellula–matrice e del rimodellamento tissutale, con collegamenti riportati alla differenziazione epiteliale e alla segnalazione del microambiente. Studi trascrittomici e funzionali hanno associato FAM198B a processi quali adesione cellulare, migrazione e organizzazione della matrice extracellulare, suggerendo un ruolo in vie che modellano la polarità cellulare e le interazioni intercellulari. Un’alterata espressione di FAM198B è stata osservata in molteplici contesti tumorali e stati di sviluppo, a supporto della sua utilità come readout molecolare in studi su invasione, interazioni con lo stroma e regolazione genica specifica di linea. Queste caratteristiche rendono FAM198B un bersaglio rilevante per indagini meccanicistiche in biologia del cancro, nella segnalazione correlata alla fibrosi e nelle transizioni di stato cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale FAM198B (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FAM198B in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FAM198B (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FAM198B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FAM198B. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FAM198B e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.