Plasmide CRISPR d'Activation (m) FAM195A: sc-426985-ACT

Fam195a code la protéine murine FAM195A, un facteur encore mal caractérisé, mais dont les liens avec la signalisation intracellulaire et des programmes cellulaires sensibles au stress commencent à émerger, au vu de son architecture en domaines conservés et de ses profils d’expression. Les données disponibles suggèrent un rôle dans la régulation de l’homéostasie protéique et de processus associés aux membranes, susceptibles d’influencer la croissance cellulaire, la différenciation et l’adaptation aux signaux métaboliques. Une activité altérée des voies contrôlant la protéostase et la signalisation du stress est largement pertinente pour des phénotypes touchant le maintien des tissus ainsi que les fonctions immunitaires ou le neurodéveloppement, ce qui fait de Fam195a un locus utile pour des études mécanistiques. Comme les annotations fonctionnelles restent limitées, une modulation contrôlée de l’expression endogène de Fam195a peut aider à définir les réseaux transcriptionnels en aval et les dépendances vis‑à‑vis de certaines voies.

FAM195A Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Fam195a sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FAM195A Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Fam195a dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Fam195a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FAM195A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Fam195a natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FAM195A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FAM195A dans les cellules tumorales présentant une expression de Fam195a silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.