FAM122A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-426886

Übersicht

Fam122a kodiert FAM122A, ein konserviertes regulatorisches Protein, das an der Kontrolle der Aktivität von Serin/Threonin-Phosphatasen beteiligt ist, insbesondere durch die Modulation von PP2A-Komplexen. Durch die Beeinflussung der PP2A-abhängigen Dephosphorylierung kann FAM122A phosphorylierungsgetriebene Signalprogramme beeinflussen, die mit Zellzyklusprogression, DNA-Schadensantworten und umfassenderen Proteostase-Netzwerken verknüpft sind. Eine gestörte PP2A-Regulation wird breit mit veränderter Wachstumskontrolle und Stresssignalgebung in Verbindung gebracht, wodurch Fam122a ein nützliches Ziel für mechanistische Studien phosphatasezentrierter Signalwege darstellt. In Mausmodellen ermöglicht eine Perturbation von Fam122a die Untersuchung, wie die Homöostase der Phosphorylierung zelluläre Phänotypen prägt, die für krankheitsassoziierte Fehlregulation von Signalwegen relevant sind.

Das FAM122A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Fam122a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Fam122a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Fam122a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FAM122A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Fam122a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FAM122A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Fam122a-Exone abzielen, die für die FAM122A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Fam122a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FAM122A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FAM122A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Fam122a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FAM122A HDR-Plasmid (m) und FAM122A HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Fam122a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Fam122a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.