Plásmido Doble Nickase (h) FADD: sc-400580-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)FADD consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa FADD (h) y el plásmido de doble nickasa FADD (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FADD. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: FADD Anticuerpo (G-4): sc-271748
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) FADD | sc-400580-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) FADD | sc-400580-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FADD (proteína asociada a Fas con dominio de muerte) es un adaptador esencial que acopla receptores de muerte activados como FAS/CD95 y TNFRSF10 (receptores de TRAIL) a caspasas iniciadoras, permitiendo la apoptosis extrínseca mediante la formación del complejo de señalización inductor de muerte. Más allá de la apoptosis, FADD participa en la comunicación cruzada con las vías de NF-κB y MAPK y contribuye a la regulación de la necroptosis al modular el equilibrio de señalización RIPK1/RIPK3. La expresión o señalización alteradas de FADD se han asociado con una supervivencia celular desregulada, respuestas inflamatorias aberrantes y tumorigénesis, lo que lo convierte en un nodo frecuente en estudios de homeostasis inmunitaria y muerte celular inducida por estrés. Estas funciones sitúan a FADD como un vínculo mecanístico entre la señalización por receptores, las cascadas de activación de proteasas y resultados dependientes del contexto en células humanas.
FADD El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FADD en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FADD. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FADD. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FADD alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.