F-Spondin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404101

Panoramica

SPON1 codifica F-spondina, una glicoproteina secreta associata alla matrice extracellulare (ECM), particolarmente abbondante nel sistema nervoso, che modula le interazioni cellula–matrice, la crescita dei neuriti e la guida assonale durante lo sviluppo e il rimodellamento dei tessuti. F-spondina può influenzare l’adesione e la migrazione attivando segnali dipendenti da integrine e proteoglicani e contribuendo all’organizzazione della matrice extracellulare. È stata collegata alla regolazione della connettività sinaptica e della plasticità neuronale, e un’alterata espressione di SPON1 è stata riportata in contesti di neurodegenerazione e di rimodellamento associato a lesioni. In quanto segnale dell’ECM, F-spondina è studiata anche per i suoi ruoli nei processi vascolari e fibrotici, in cui la segnalazione mediata dalla matrice e la motilità cellulare sono centrali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO F-Spondin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SPON1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SPON1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SPON1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina F-Spondin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SPON1 per lo studio della segnalazione di F-Spondin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SPON1 critici per la funzione di F-Spondin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SPON1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal F-Spondin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal F-Spondin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SPON1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal F-Spondin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR F-Spondin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SPON1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SPON1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.