Plasmide Double Nickase (h) EY-cadherin: sc-401988-NIC

CDH18 code l’EY-cadhérine humaine, un récepteur d’adhésion cellule–cellule dépendant du calcium appartenant à la superfamille des cadhérines, qui contribue à l’architecture tissulaire et à la signalisation médiée par le contact. Par l’adhésion homophilique et son couplage aux caténines ainsi qu’au cytosquelette d’actine, l’EY-cadhérine influence l’organisation des jonctions d’adhérence, la polarité cellulaire et le remodelage du cytosquelette. Des altérations des profils d’expression des cadhérines peuvent perturber les programmes d’adhésion épithéliaux et associés au tissu nerveux, affectant la migration cellulaire et les états de différenciation. La dérégulation de l’adhésion médiée par les cadhérines a été associée à des phénotypes invasifs et à une signalisation développementale aberrante dans de multiples contextes pathologiques, ce qui fait de CDH18 une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biologie des jonctions.

EY-cadherin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDH18 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDH18. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDH18. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDH18.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.