EY-cadherin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401988

Panoramica

CDH18 codifica l’EY-caderina umana, un membro della famiglia delle caderine classiche che supporta l’adesione cellula–cellula dipendente dal Ca²⁺ e contribuisce all’architettura tissutale collegando le giunzioni aderenti al citoscheletro di actina tramite complessi di catenine. Attraverso la regolazione della coesione intercellulare, della polarità e della segnalazione dipendente dal contatto, CDH18 può influenzare processi legati all’organizzazione epiteliale e neuronale, inclusi la migrazione e la formazione di confini. Alterazioni nell’espressione delle caderine e nell’integrità delle giunzioni sono frequentemente associate a differenziamento disregolato e comportamento invasivo in modelli rilevanti per la patologia, rendendo CDH18 un nodo utile per lo studio di fenotipi guidati dall’adesione. I pattern di espressione di CDH18 e le perturbazioni genetiche o epigenetiche sono stati investigati in contesti in cui identità e connettività cellulari risultano compromesse, inclusi il cancro e i disturbi del neurosviluppo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EY-cadherin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDH18 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDH18 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDH18 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EY-cadherin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDH18 per lo studio della segnalazione di EY-cadherin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CDH18 critici per la funzione di EY-cadherin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDH18 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EY-cadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EY-cadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDH18. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EY-cadherin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EY-cadherin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDH18 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDH18 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.