Plasmide CRISPR/Cas9 KO EY-cadherin (h): sc-401988

Présentation

CDH18 code l’EY-cadhérine humaine, un membre de la famille des cadhérines classiques qui assure une adhésion cellule–cellule dépendante du Ca²⁺ et contribue à l’architecture tissulaire en reliant les jonctions d’adhérence au cytosquelette d’actine via des complexes de caténines. En régulant la cohésion intercellulaire, la polarité et la signalisation dépendante du contact, CDH18 peut influencer des processus liés à l’organisation épithéliale et neuronale, notamment la migration et la formation de frontières. Des altérations de l’expression des cadhérines et de l’intégrité jonctionnelle sont fréquemment associées, dans des modèles pertinents pour la maladie, à une différenciation dérégulée et à un comportement invasif, faisant de CDH18 un nœud utile pour l’étude de phénotypes gouvernés par l’adhésion. Les profils d’expression de CDH18 ainsi que des perturbations génétiques ou épigénétiques ont été étudiés dans des contextes où l’identité et la connectivité cellulaires sont altérées, notamment le cancer et les troubles du neurodéveloppement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EY-cadherin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CDH18 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CDH18, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CDH18 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EY-cadherin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CDH18 pour l'étude de la signalisation de EY-cadherin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CDH18 essentiels à la fonction de EY-cadherin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CDH18 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EY-cadherin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le EY-cadherin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CDH18. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EY-cadherin plasmide HDR (h) et le EY-cadherin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CDH18 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CDH18 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.