Plasmide Double Nickase (m) EXT1: sc-420252-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) EXT1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide EXT1 Double Nickase (m) et le plasmide EXT1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ext1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: EXT1 Antibody (A-7): sc-515144
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) EXT1 | sc-420252-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Ext1** code l’exostosine glycosyltransférase 1 (EXT1), un composant essentiel du complexe EXT1/EXT2 qui catalyse l’élongation des chaînes d’héparane sulfate dans l’appareil de Golgi. En contrôlant la biosynthèse des protéoglycanes à héparane sulfate, EXT1 module les interactions ligand–récepteur et la formation de gradients qui influencent des voies telles que les signalisations FGF, Wnt, Hedgehog et BMP. La structure des glycosaminoglycanes dépendante d’EXT1 affecte également l’organisation de la matrice extracellulaire, l’adhérence cellulaire et le trafic endocytaire des morphogènes et des facteurs de croissance. La perturbation de la fonction d’EXT1 est associée à un développement squelettique aberrant et à une altération de la mise en place des tissus, ce qui en fait une cible clé pour l’étude des signalisations régulées par l’héparane sulfate et de la biologie de la matrice.
EXT1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ext1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ext1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ext1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ext1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.