Evx-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420249

Übersicht

Evx1 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor Evx-1, einen Entwicklungsregulator, der den Embryo strukturiert und zur Festlegung von Zellschicksalsentscheidungen entlang der anterior–posterioren Achse beiträgt. In der Maus ist Evx-1 an transkriptionellen Netzwerken beteiligt, die die Morphogenese koordinieren, darunter Genprogramme, die mit der Musterbildung des Neuralrohrs, der Regionalisierung von Hinterhirn und Rückenmark sowie der Somitenentwicklung verknüpft sind. Als sequenzspezifisches DNA-bindendes Protein beeinflusst Evx-1 nachgeschaltete Signal- und Differenzierungswege, indem es linienbeschränkte transkriptionelle Zustände steuert. Eine fehlregulierte Aktivität von Homeobox-Genen, einschließlich veränderter EVX1-Programme, wird im Hinblick auf ihre Auswirkungen auf angeborene Fehlbildungen und abweichende Differenzierungsphänotypen in Entwicklungsmodellen untersucht.

Das Evx-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Evx1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Evx1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Evx1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Evx-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Evx1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Evx-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Evx1-Exone abzielen, die für die Evx-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Evx1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Evx-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Evx-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Evx1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Evx-1 HDR-Plasmid (m) und Evx-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Evx1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Evx1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.