ETO-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-404475-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ETO-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ETO-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und ETO-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CBFA2T3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ETO-2: sc-373691
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ETO-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404475-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ETO-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404475-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CBFA2T3 kodiert ETO-2, einen nukleären transkriptionellen Korepressor, der mit sequenzspezifischen DNA-bindenden Faktoren zusammenarbeitet, um die Genexpression in der Hämatopoese und die Festlegung von Zelllinien zu regulieren. ETO-2 wirkt in multiproteinären Repressionskomplexen, die häufig N-CoR/SMRT, HDACs und weitere Chromatinmodifikatoren enthalten, und verknüpft signalabhängige Transkription mit epigenetischer Kontrolle. Durch Interaktionen mit Proteinen der RUNX-Familie und verwandten transkriptionellen Regulatoren hilft ETO-2 dabei, Programme zu koordinieren, die Proliferation, Differenzierung und Apoptose in Blut- und Immunzellkontexten steuern. Eine veränderte CBFA2T3/ETO-2-Aktivität und dysregulierte Korepressor-Netzwerke sind mit für hämatologische Malignome relevanten Transkriptionszuständen assoziiert, was es zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung onkogener transkriptioneller Schaltkreise macht.
ETO-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CBFA2T3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CBFA2T3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CBFA2T3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CBFA2T3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.