Plásmido CRISPR de Activación (m) ETBR: sc-420112-ACT

Ednrb codifica el receptor de endotelina tipo B (ETBR), un receptor acoplado a proteína G que se une a las endotelinas para regular la señalización vasomotora, el desarrollo de células derivadas de la cresta neural y la biología de los melanocitos y del sistema nervioso entérico. La activación de ETBR pone en marcha vías canónicas de los GPCR, incluida la movilización de Ca2+ mediada por Gq/PLCβ y la señalización MAPK, modulando la migración celular, la diferenciación y el patrón tisular. En modelos murinos, la función de Ednrb está estrechamente vinculada a la especificación de linajes de la cresta neural y a la formación del sistema nervioso periférico, y sus alteraciones se asocian con aganglionosis y defectos de pigmentación. Estas propiedades hacen de ETBR un nodo relevante para estudiar la señalización del desarrollo, la comunicación célula–célula y el “crosstalk” de la vía de la endotelina en contextos fisiológicos y relacionados con enfermedad.

ETBR El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ednrb sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ETBR El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ednrb en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ednrb, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ETBR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ednrb y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ETBR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ETBR en células tumorales con expresión de Ednrb silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.