ERp72 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419416

Panoramica

Il gene murino **Pdia4** codifica **ERp72**, un membro della famiglia delle protein disulfide isomerase che risiede nel reticolo endoplasmatico e catalizza lo scambio tiolo–disolfuro durante il ripiegamento ossidativo delle proteine. ERp72 supporta il controllo qualità del RE promuovendo la corretta formazione dei legami disolfuro e cooperando con reti di chaperoni che regolano il ripiegamento, l’assemblaggio e la ritenzione di proteine secretorie e di membrana. Attraverso i suoi ruoli nella proteostasi, Pdia4 è funzionalmente collegato alla segnalazione dello stress del RE e alle vie della risposta alle proteine mal ripiegate (UPR), che modulano l’equilibrio redox e le decisioni sul destino cellulare in condizioni di elevato carico secretorio. L’alterata attività delle PDI e l’adattamento allo stress del RE sono spesso studiati in contesti quali infiammazione, disfunzione metabolica e biologia del cancro, in cui l’omeostasi della via secretoria e la capacità di ripiegamento ossidativo possono influenzare fenotipi rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ERp72 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pdia4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pdia4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pdia4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ERp72.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pdia4 per lo studio della segnalazione di ERp72, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pdia4 critici per la funzione di ERp72
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pdia4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ERp72 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ERp72 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pdia4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ERp72 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ERp72 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pdia4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pdia4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.