ERp72 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-402689-KO-2

Übersicht

PDIA4 kodiert ERp72, eine Protein-Disulfid-Isomerase des endoplasmatischen Retikulums (ER), die den Thiol–Disulfid-Austausch katalysiert und dadurch die oxidative Proteinfaltung sowie die Qualitätskontrolle fördert. ERp72 ist an der ER-assoziierten Degradation (ERAD) und der Unfolded-Protein-Response (UPR) beteiligt und trägt dazu bei, die Proteostase während der Reifung sekretorischer Proteine und bei zellulärem Stress aufrechtzuerhalten. Über seine Rolle in der Redoxregulation und chaperonähnliche Funktionen ist PDIA4 mit Signalwegen verknüpft, die oxidativen Stress und die Antigenverarbeitung in professionellen sekretorischen Zellen betreffen. Eine Fehlregulation der ER-Proteostase und der PDIA4-Aktivität wurde mit Entzündungszuständen und der Tumorbiologie in Verbindung gebracht, was PDIA4 für mechanistische Studien zur Stressanpassung und Proteinhomöostase relevant macht.

Das ERp72 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PDIA4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PDIA4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PDIA4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ERp72-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PDIA4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ERp72-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PDIA4-Exone abzielen, die für die ERp72-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PDIA4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ERp72 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ERp72 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PDIA4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ERp72 HDR-Plasmid (h) und ERp72 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PDIA4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PDIA4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.