Plasmide CRISPR/Cas9 KO ERp57 (m2): sc-420698-KO-2

Présentation

Pdia3 code pour ERp57, une isomérase des ponts disulfure (PDI) du réticulum endoplasmique qui s’associe à la calnexine et à la calréticuline afin de catalyser la formation et l’isomérisation des ponts disulfure lors du repliement des glycoprotéines. ERp57 soutient le contrôle qualité du RE et la protéostasie en favorisant la maturation des protéines sécrétoires et membranaires, et en modulant la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) en conditions de stress du RE. Dans le système immunitaire, ERp57 contribue au chargement des peptides sur le complexe majeur d’histocompatibilité de classe I en tant que composant du complexe de chargement peptidique, reliant ainsi le repliement dépendant de l’état rédox à la présentation d’antigènes. Des altérations de l’activité d’ERp57 ont été associées à une dérégulation de l’homéostasie protéique et des voies du stress oxydant, pertinentes pour la recherche sur la neurodégénérescence, les dysfonctions métaboliques et la biologie du cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ERp57 (m2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pdia3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pdia3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pdia3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ERp57.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pdia3 pour l'étude de la signalisation de ERp57, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pdia3 essentiels à la fonction de ERp57
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pdia3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ERp57 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ERp57 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pdia3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ERp57 plasmide HDR (m) et le ERp57 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pdia3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pdia3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.