Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ERp57 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m2): sc-420698-KO-2
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ERp57 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m2) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ERp57, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ERp57 Anticuerpo (MaP.ERp57): sc-23886
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ERp57 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m2) | sc-420698-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Pdia3 codifica ERp57, una isomerasa de disulfuro de proteínas del retículo endoplásmico que se asocia con calnexina y calreticulina para catalizar la formación e isomerización de puentes disulfuro durante el plegamiento de glicoproteínas. ERp57 contribuye al control de calidad del RE y a la proteostasis al promover la maduración de proteínas secretoras y de membrana, e influye en la señalización de la respuesta a proteínas mal plegadas bajo condiciones de estrés del RE. En el sistema inmunitario, ERp57 participa en la carga de péptidos del complejo mayor de histocompatibilidad de clase I como parte del complejo de carga de péptidos, vinculando el plegamiento dependiente del estado redox con la presentación de antígenos. La actividad alterada de ERp57 se ha asociado con una homeostasis proteica desregulada y con vías de estrés oxidativo relevantes para la investigación en neurodegeneración, disfunción metabólica y biología del cáncer.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ERp57 (m2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pdia3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pdia3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pdia3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ERp57.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pdia3 para la investigación de la señalización de ERp57, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Pdia3 críticos para la función de ERp57
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pdia3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ERp57 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ERp57 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pdia3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ERp57 (m) y el plásmido HDR ERp57 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pdia3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pdia3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.