ERp57 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420698

Übersicht

Pdia3 kodiert ERp57 (auch bekannt als PDIA3/GRP58), eine Thiol-Disulfid-Oxidoreduktase des endoplasmatischen Retikulums, die mit Calnexin und Calreticulin zusammenwirkt, um die oxidative Faltung und Qualitätskontrolle neu synthetisierter Glykoproteine zu fördern. ERp57 unterstützt die Proteostase im ER durch die Bildung von Disulfidbrücken und ist eng mit der Signalgebung der Unfolded-Protein-Response (UPR), dem ER-assoziierten Abbau (ERAD) und der Redoxhomöostase verknüpft. Über das ER-Lumen hinaus wird PDIA3 eine Rolle bei der Antigenpräsentation über das Beladen von MHC‑Klasse‑I-Molekülen mit Peptiden sowie bei der Modulation von Signalwegen zugeschrieben, die mit der Anpassung an zellulären Stress verbunden sind. Eine Fehlregulation der PDIA3/ERp57-Aktivität wird mit Zuständen in Verbindung gebracht, die durch proteotoxischen und oxidativen Stress gekennzeichnet sind, darunter Modelle neurodegenerativer und metabolischer Erkrankungen, was PDIA3 für mechanistische Studien zu ER-Stress und immunbezogenen Prozessen relevant macht.

Das ERp57 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pdia3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pdia3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pdia3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ERp57-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pdia3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ERp57-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Pdia3-Exone abzielen, die für die ERp57-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pdia3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ERp57 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ERp57 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pdia3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ERp57 HDR-Plasmid (m) und ERp57 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pdia3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pdia3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.