Partículas Lentivirales de Activación (h) ERK 1: sc-400010-LAC

MAPK3 codifica la quinasa 1 regulada por señales extracelulares (ERK1), una quinasa de serina/treonina que integra señales aguas arriba procedentes de receptores tirosina quinasa, de la señalización RAS–RAF y de MEK1/2 para controlar programas dependientes de la fosforilación implicados en la proliferación, la diferenciación, la supervivencia y las respuestas al estrés. ERK1 actúa dentro de la cascada canónica MAPK/ERK y modula sustratos nucleares y citoplasmáticos, incluidos factores de transcripción y reguladores del ciclo celular, para moldear una expresión génica específica del contexto. La actividad desregulada de la vía ERK se asocia con frecuencia a una señalización de crecimiento aberrante y a decisiones alteradas del destino celular en diversos contextos patológicos, lo que convierte a MAPK3 en un nodo central para estudios mecanísticos de la dinámica de señalización y el crosstalk entre vías.

Las partículas de activación lentiviral ERK 1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de MAPK3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ERK 1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción MAPK3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ERK 1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo MAPK3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.