Erg-1/2/3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400404-ACT

ERG codifica un fattore di trascrizione della famiglia ETS (Erg-1/2/3) che si lega a motivi di DNA ricchi di purine per regolare programmi genici che controllano lo sviluppo ematopoietico, la differenziazione endoteliale e le decisioni sul destino cellulare. ERG integra segnali provenienti dalle vie MAPK/ERK e PI3K per coordinare reti trascrizionali coinvolte in proliferazione, adesione e omeostasi vascolare. L’espressione deregolata o i riarrangiamenti di ERG sono frequentemente studiati nel contesto della riprogrammazione trascrizionale oncogena, incluse leucemie e cancro della prostata, e sono rilevanti anche per l’angiogenesi e la biologia vascolare infiammatoria. Queste caratteristiche rendono ERG un nodo ampiamente utilizzato per analizzare circuiti trascrizionali che specificano la linea cellulare e reti di regolazione genica associate alla malattia.

Erg-1/2/3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ERG senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Erg-1/2/3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ERG nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ERG, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Erg-1/2/3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ERG nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Erg-1/2/3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Erg-1/2/3 nelle cellule tumorali con espressione di ERG silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.