eRF3a Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404748-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- eRF3aO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase eRF3a (h) e o Plasmídeo Double Nickase eRF3a (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para GSPT1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
eRF3a Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404748-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eRF3a Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404748-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O GSPT1 humano codifica a eRF3a, um fator de terminação da tradução que forma um complexo funcional com a eRF1 para promover a liberação de peptídeos dependente de GTP em códons de parada e coordenar a reciclagem do ribossomo. Além da terminação, a eRF3a participa de vias de vigilância de mRNA, como a degradação de mRNA mediada por nonsense (NMD), e influencia a proteostase ao conectar a dinâmica da tradução ao controle de qualidade proteico. A atividade de GSPT1 integra-se à regulação do ciclo celular e a programas traducionais responsivos ao estresse, e alterações de expressão têm sido associadas a fenótipos proliferativos em múltiplos contextos relevantes para o câncer. Como um nó central na fidelidade da tradução e na renovação/turnover de mRNA, a eRF3a é frequentemente estudada para investigar mecanismos de reconhecimento de códons de parada, estabilidade de transcritos e controle de crescimento.
eRF3a O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GSPT1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GSPT1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GSPT1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GSPT1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.