Plásmido Doble Nickase (h) eRF3a: sc-404748-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)eRF3a consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa eRF3a (h) y el plásmido de doble nickasa eRF3a (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GSPT1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) eRF3a | sc-404748-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) eRF3a | sc-404748-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **GSPT1** codifica **eRF3a**, un factor de terminación de la traducción que forma un complejo funcional con **eRF1** para promover la liberación del péptido dependiente de GTP en los codones de parada y coordinar el reciclaje del ribosoma. Además de la terminación, eRF3a participa en vías de vigilancia del ARNm, como la degradación del ARNm mediada por codones sin sentido (NMD), e influye en la proteostasis al vincular la dinámica de la traducción con el control de calidad proteico. La actividad de GSPT1 se integra con la regulación del ciclo celular y con programas de traducción sensibles al estrés, y la alteración de su expresión se ha asociado con fenotipos proliferativos en múltiples contextos relevantes para el cáncer. Como nodo central de la fidelidad translacional y del recambio de ARNm, eRF3a se estudia con frecuencia para investigar los mecanismos de reconocimiento de codones de parada, la estabilidad de los transcritos y el control del crecimiento.
eRF3a El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GSPT1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GSPT1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GSPT1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GSPT1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.