ERdj3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404935

Übersicht

DNAJB11 kodiert ERdj3, ein im ER-Lumen lokalisiertes Hsp40-Ko-Chaperon, das mit BiP/HSPA5 zusammenarbeitet, um die Faltung neu synthetisierter sekretorischer und membranständiger Proteine zu fördern und Aggregation zu begrenzen. ERdj3 trägt zur Proteostase im endoplasmatischen Retikulum bei, indem es die ATPase-Aktivität von BiP stimuliert, Qualitätskontrollentscheidungen im Zusammenhang mit der ER-assoziierten Degradation (ERAD) koordiniert und während ER-Stress die Signalübertragung der Unfolded-Protein-Response (UPR) moduliert. Über diese Funktionen beeinflusst DNAJB11 die Effizienz des sekretorischen Weges und die zelluläre Anpassung an eine Belastung durch fehlgefaltete Proteine – Prozesse, die mit Erkrankungen verbunden sind, die durch ein Ungleichgewicht der Proteostase gekennzeichnet sind, darunter Nieren- und Leberpathophysiologie sowie krebsassoziierte Stressantworten. Seine Rolle in Chaperon-Netzwerken macht es relevant für die Untersuchung, wie ER-Stress mit Apoptose, Entzündung und metabolischer Umprogrammierung verknüpft ist.

Das ERdj3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DNAJB11-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DNAJB11-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DNAJB11 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ERdj3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DNAJB11-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ERdj3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DNAJB11-Exone abzielen, die für die ERdj3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DNAJB11-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ERdj3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ERdj3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DNAJB11-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ERdj3 HDR-Plasmid (h) und ERdj3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DNAJB11-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DNAJB11-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.