ERdj3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404935

Panoramica

DNAJB11 codifica ERdj3, un co-chaperone Hsp40 luminale del RE che collabora con BiP/HSPA5 per favorire il corretto ripiegamento delle proteine secretorie e di membrana di nuova sintesi e limitarne l’aggregazione. ERdj3 partecipa alla proteostasi del reticolo endoplasmatico stimolando l’attività ATPasica di BiP, coordinando le decisioni di controllo qualità collegate alla degradazione associata al RE (ERAD) e modulando la segnalazione della risposta alle proteine non ripiegate (UPR) durante lo stress del RE. Attraverso queste funzioni, DNAJB11 influenza l’efficienza della via secretoria e l’adattamento cellulare al carico di proteine mal ripiegate, processi implicati in disturbi caratterizzati da uno squilibrio della proteostasi, inclusa la fisiopatologia renale ed epatica, nonché le risposte allo stress associate al cancro. Il suo ruolo nelle reti di chaperoni lo rende rilevante per studiare come lo stress del RE si integri con apoptosi, infiammazione e rimodellamento metabolico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ERdj3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DNAJB11 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DNAJB11 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DNAJB11 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ERdj3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DNAJB11 per lo studio della segnalazione di ERdj3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DNAJB11 critici per la funzione di ERdj3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DNAJB11 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ERdj3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ERdj3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DNAJB11. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ERdj3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ERdj3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DNAJB11 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DNAJB11 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.