Plásmido CRISPR de Activación (h) ERBIN: sc-402637-ACT

ERBIN (proteína que interactúa con ERBB2) es una proteína andamiaje que contiene un dominio PDZ, se localiza en las membranas basolaterales y coordina el ensamblaje de complejos de receptores, su tráfico y el direccionamiento de señales. Modula la salida de la vía ERBB2/EGFR y se conecta con la señalización MAPK y PI3K al organizar nodos de señalización cercanos a la membrana y acoplar receptores con efectores aguas abajo. ERBIN también influye en la polaridad epitelial y en la organización de las uniones mediante interacciones con reguladores de polaridad y adhesión, dando forma a la arquitectura celular y a la fidelidad de la señalización. La expresión desregulada de ERBIN o una función de andamiaje alterada se ha asociado con señalización aberrante de factores de crecimiento y defectos de polaridad, relevantes para estudios mecanísticos en oncología y otras patologías epiteliales.

ERBIN El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ERBIN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ERBIN El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ERBIN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ERBIN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ERBIN. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ERBIN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ERBIN en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ERBIN en células tumorales con expresión de ERBIN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.