Plásmido Doble Nickase (h) ErbB3/HER3: sc-400146-NIC

ERBB3 codifica ErbB3/HER3, un miembro de la familia de receptores tirosina cinasa ERBB con un dominio cinasa intrínseco deficiente que funciona principalmente mediante heterodimerización, especialmente con ERBB2/HER2. La activación dependiente de ligando por neuregulinas impulsa la formación de complejos de receptores y eventos de fosforilación que propagan la señalización PI3K–AKT y MAPK, coordinando la proliferación, la supervivencia, la diferenciación y las decisiones sobre el destino celular epitelial. ERBB3 se implica con frecuencia en redes de señalización oncogénica, donde una expresión alterada o el reconfigurado de las vías puede favorecer cambios en la dependencia de factores de crecimiento y una señalización adaptativa. Su papel central en la comunicación cruzada entre receptores lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudiar la robustez de la señalización, la regulación por retroalimentación y los mecanismos de resistencia a fármacos a nivel de vía.

ErbB3/HER3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ERBB3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ERBB3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ERBB3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ERBB3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.