Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO EPI64 (h): sc-407095
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- EPI64 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique EPI64, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: EPI64 Antibody (B-9): sc-376991
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO EPI64 (h) | sc-407095 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
TBC1D10A code pour EPI64, une protéine activatrice de GTPase (GAP) des Rab, qui module le trafic vésiculaire en accélérant l’hydrolyse du GTP sur certains membres spécifiques de la famille Rab. En régulant le recyclage endocytaire et le transport membranaire, EPI64 influence le renouvellement des récepteurs, l’identité des compartiments et la propagation des signaux de la membrane plasmique vers les réseaux endosomaux. Ces processus recoupent l’organisation du cytosquelette et les programmes de migration cellulaire, souvent remaniés dans la signalisation immunitaire et les phénotypes associés au cancer. Un trafic dérégulé médié par les Rab a été associé à des altérations de la prolifération, de l’invasion et des réponses inflammatoires, faisant de TBC1D10A un nœud utile pour des études mécanistiques de la dynamique membranaire dans les cellules humaines.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EPI64 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TBC1D10A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TBC1D10A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TBC1D10A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EPI64.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TBC1D10A pour l'étude de la signalisation de EPI64, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de TBC1D10A essentiels à la fonction de EPI64
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TBC1D10A pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le EPI64 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le EPI64 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TBC1D10A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le EPI64 plasmide HDR (h) et le EPI64 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TBC1D10A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TBC1D10A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.