Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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EPI64 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407095
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- EPI64 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico EPI64, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: EPI64 Anticuerpo (B-9): sc-376991
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
EPI64 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-407095 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
TBC1D10A codifica EPI64, una proteína activadora de GTPasas Rab (GAP) que modula el tráfico vesicular al acelerar la hidrólisis de GTP en miembros específicos de la familia Rab. Mediante la regulación del reciclaje endocítico y el transporte de membranas, EPI64 influye en el recambio de receptores, la identidad de los compartimentos y la propagación de señales desde la membrana plasmática hacia las redes endosomales. Estos procesos se entrecruzan con la organización del citoesqueleto y los programas de migración celular, que con frecuencia se reconfiguran en la señalización inmunitaria y en fenotipos asociados al cáncer. La desregulación del tráfico mediado por Rab se ha vinculado con cambios en la proliferación, la invasión y las respuestas inflamatorias, lo que convierte a TBC1D10A en un nodo útil para estudios mecanísticos de la dinámica de membranas en células humanas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO EPI64 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TBC1D10A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TBC1D10A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TBC1D10A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EPI64.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TBC1D10A para la investigación de la señalización de EPI64, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de TBC1D10A críticos para la función de EPI64
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TBC1D10A para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido EPI64 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido EPI64 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TBC1D10A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EPI64 (h) y el plásmido HDR EPI64 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TBC1D10A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TBC1D10A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.