EphB6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420202

Panoramica

Ephb6 codifica EphB6, un membro della famiglia dei recettori tirosin-chinasici Eph che partecipa alla segnalazione dipendente dal contatto con i ligandi ephrin-B per regolare la comunicazione cellula‑cellula. Sebbene EphB6 presenti un’attività chinasica ridotta rispetto ad altri recettori EphB, modula il clustering dei recettori e le vie a valle che controllano il rimodellamento del citoscheletro, l’adesione cellulare e la migrazione direzionale, con collegamenti alla segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho e al crosstalk tra le reti MAPK/PI3K. Nei sistemi murini, EphB6 è studiato in processi quali l’attivazione delle cellule immunitarie e l’organizzazione tissutale, in cui gradienti ephrin–Eph determinano il posizionamento cellulare. La deregolazione della segnalazione associata a EphB6 è stata indagata in contesti di alterato comportamento epiteliale e fenotipi legati ai tumori, supportandone l’uso come nodo meccanicistico in studi sul controllo della crescita e sulle interazioni con il microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EphB6 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ephb6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ephb6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ephb6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EphB6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ephb6 per lo studio della segnalazione di EphB6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ephb6 critici per la funzione di EphB6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ephb6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EphB6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal EphB6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ephb6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EphB6 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR EphB6 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ephb6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ephb6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.