Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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EphB4 Double Nickase Plasmid (h): sc-401122-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EphB4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EphB4 Double-Nickase-Plasmid (h) und EphB4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EPHB4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: EphB4: sc-365510
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EphB4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401122-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EphB4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401122-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPHB4 kodiert die Rezeptor-Tyrosinkinase EphB4, einen zentralen Vermittler kontaktabhängiger Signalübertragung über Ephrin‑B‑Liganden, die Zellpositionierung, Grenzbildung und vaskuläre Morphogenese koordiniert. Nach Bindung von Ephrin löst EphB4 eine bidirektionale Signalgebung aus, die mit GTPasen der Rho‑Familie sowie den Src/FAK‑, PI3K–AKT‑ und MAPK‑Signalwegen verknüpft ist und so Zytoskelettdynamik, Adhäsion und Migration reguliert. Die Aktivität von EphB4 ist eng mit der Endothelbiologie und der arteriovenösen Spezifizierung verbunden, und eine Fehlregulation der EPHB4–Ephrin‑Signalgebung wurde in mehreren Krankheitskontexten, darunter Krebs und vaskuläre Malformationen, mit verändertem angiogenem Verhalten und invasiven Phänotypen in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen EPHB4 zu einem häufig genutzten Ziel für mechanistische Studien zur Zell‑Zell‑Kommunikation, Gefäßentwicklung und Signalgebung im Mikromilieu.
EphB4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EPHB4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EPHB4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EPHB4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EPHB4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.