EphA7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420197

Panoramica

Epha7 codifica EphA7, una tirosin-chinasi recettoriale della famiglia Eph/ephrin che media una segnalazione dipendente dal contatto per regolare il posizionamento cellulare, l’adesione e la guida repulsiva durante lo sviluppo. L’attivazione di EphA7 influenza il rimodellamento del citoscheletro e vie a valle come la segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho, MAPK/ERK e processi dipendenti da PI3K, che modellano la migrazione, la formazione di confini e il targeting assonale. Nei tessuti murini, EphA7 è implicata nel patterning neurale e nell’assemblaggio dei circuiti, dove un’alterata segnalazione Eph/ephrin può perturbare la connettività e l’organizzazione tissutale. La deregolazione della segnalazione associata a EphA7 è stata studiata in modelli di anomalie del neurosviluppo e di biologia tumorale attraverso effetti su proliferazione, invasione e interazioni con il microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EphA7 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Epha7 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Epha7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Epha7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EphA7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Epha7 per lo studio della segnalazione di EphA7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Epha7 critici per la funzione di EphA7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Epha7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EphA7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal EphA7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Epha7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EphA7 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR EphA7 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Epha7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Epha7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.