EphA7 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420197

Descripción general

Epha7 codifica EphA7, una tirosina quinasa receptora de la familia Eph/ephrina que media señalización dependiente de contacto para regular el posicionamiento celular, la adhesión y la guía repulsiva durante el desarrollo. La activación de EphA7 influye en la remodelación del citoesqueleto y en vías posteriores como la señalización de GTPasas de la familia Rho, MAPK/ERK y procesos dependientes de PI3K, que moldean la migración, la formación de límites y el direccionamiento axonal. En tejidos de ratón, EphA7 está implicado en el patrón neural y el ensamblaje de circuitos, donde una señalización Eph/ephrina alterada puede perturbar la conectividad y la organización tisular. La desregulación de la señalización asociada a EphA7 se ha estudiado en modelos de anomalías del neurodesarrollo y biología tumoral por sus efectos sobre la proliferación, la invasión y las interacciones con el microambiente.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO EphA7 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Epha7 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Epha7 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Epha7 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EphA7.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Epha7 para la investigación de la señalización de EphA7, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Epha7 críticos para la función de EphA7
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Epha7 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido EphA7 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido EphA7 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Epha7. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EphA7 (m) y el plásmido HDR EphA7 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Epha7 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Epha7 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.