Plasmide CRISPR d'Activation (h) EphA7: sc-401722-ACT

EPHA7 code pour EphA7, un membre de la famille des récepteurs à activité tyrosine kinase des éphrines, qui assure une signalisation dépendante du contact entre cellules adjacentes. EphA7 participe à la signalisation bidirectionnelle Eph/éphrin pour réguler le remodelage du cytosquelette, l’adhésion cellulaire et la migration dirigée, avec des rôles établis dans la mise en place des tissus et le développement neuronal. Les effets en aval recoupent fréquemment la signalisation des GTPases de la famille Rho ainsi que les programmes associés à MAPK/ERK et PI3K/AKT, qui influencent la prolifération et la survie. Une expression ou une signalisation altérée d’EPHA7 a été rapportée dans de multiples types de cancers et dans des contextes neurodéveloppementaux, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de l’invasion, de la différenciation et de la communication cellule–cellule.

EphA7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EPHA7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

EphA7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EPHA7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EPHA7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de EphA7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EPHA7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de EphA7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie EphA7 dans les cellules tumorales présentant une expression de EPHA7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.