Plasmide CRISPR/Cas9 KO Epac (r): sc-437373
- Espèces cibles: rat
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Epac Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (r) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Epac, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Epac Antibody (A-5): sc-28366
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Epac (r) | sc-437373 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Epac (Exchange Protein Directement Activée par l’AMPc ; famille RAPGEF3/RAPGEF4) est un facteur d’échange de nucléotides guanyliques sensible à l’AMPc, qui active Rap1 et Rap2 indépendamment de la PKA. Via la signalisation des GTPases Rap, Epac régule l’adhésion médiée par les intégrines, le remodelage du cytosquelette, le trafic vésiculaire et les propriétés de la barrière endothéliale, influençant la migration cellulaire et la stabilité des jonctions. Les voies de signalisation de l’AMPc dépendantes d’Epac s’entrecroisent également avec les voies MAPK/ERK et PI3K-AKT pour moduler les réponses inflammatoires et la signalisation du stress cellulaire. Une dérégulation de la signalisation Epac-Rap a été impliquée dans des processus cardiovasculaires et neurobiologiques, notamment une perméabilité vasculaire altérée et une excitabilité neuronale modifiée, ce qui en fait une cible mécanistique pertinente dans des modèles de rat liés aux maladies.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Epac (r) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Epac.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de Epac, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de Epac
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Epac plasmide CRISPR/Cas9 KO (r) et le Epac plasmide CRISPR/Cas9 KO (r2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Epac plasmide HDR (r) et le Epac (r2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.