Epac CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401807

Übersicht

RAPGEF3 kodiert Epac (Exchange Protein Directly Activated by cAMP), einen Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor, der die cAMP-Signalübertragung mit der Aktivierung der kleinen GTPasen Rap1 und Rap2 verknüpft. Epac moduliert die intrazelluläre Signaltransduktion in Prozessen wie Zelladhäsion, Regulation der Endothelbarriere, Sekretion und calciumabhängigen Antworten über cAMP-abhängige Signalwege, die sich mit den PKA-, MAPK- und Integrin-Signalnetzwerken überschneiden. In menschlichen Zellen beeinflusst die RAPGEF3/Epac-Aktivität Funktionen von Gefäß- und Immunzellen und wurde in Zusammenhängen wie Stoffwechselregulation, inflammatorischer Signalgebung und tumorassoziierten Migrationsphänotypen von Zellen untersucht. Die Aufschlüsselung der RAPGEF3-abhängigen cAMP–Rap-Signalübertragung trägt dazu bei zu klären, wie die Dynamik von Second Messengern das Zytoskelett-Remodeling und kompartimentierte Signalkomplexe formt.

Das Epac CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RAPGEF3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RAPGEF3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RAPGEF3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Epac-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RAPGEF3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Epac-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RAPGEF3-Exone abzielen, die für die Epac-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RAPGEF3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Epac CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Epac CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RAPGEF3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Epac HDR-Plasmid (h) und Epac HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RAPGEF3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RAPGEF3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.