Epac CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-401807

개요

RAPGEF3는 Epac(cAMP에 의해 직접 활성화되는 교환 단백질)을 암호화하며, cAMP 신호를 Rap1 및 Rap2 소형 GTPase의 활성화와 연결하는 구아닌 뉴클레오타이드 교환 인자(GEF)입니다. Epac은 PKA, MAPK, 인테그린 신호 네트워크와 교차하는 cAMP 의존성 경로를 통해 세포 부착, 내피 장벽 조절, 분비, 칼슘 의존적 반응 등의 과정에서 세포 내 신호전달을 조절합니다. 인간 세포에서 RAPGEF3/Epac 활성은 혈관 및 면역세포 기능에 영향을 미치며, 대사 조절, 염증성 신호, 종양 연관 세포 이동성 표현형 등의 맥락에서 연구되어 왔습니다. RAPGEF3 의존적 cAMP–Rap 신호를 정밀하게 분석하는 것은 2차 전달자의 동역학이 세포골격 재구성과 구획화된 신호 복합체 형성에 어떤 방식으로 영향을 주는지 이해하는 데 도움이 됩니다.

Epac CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 RAPGEF3 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 RAPGEF3 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 RAPGEF3의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 Epac 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 Epac 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 RAPGEF3 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• Epac 기능에 중요한 RAPGEF3 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 RAPGEF3 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• Epac CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 Epac CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 RAPGEF3 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  Epac HDR 플라스미드 (h) 및 Epac HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 RAPGEF3 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 RAPGEF3 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.