ENT4 Plasmide Double Nickase (h): sc-405115-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ENT4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ENT4 Double Nickase Plasmid (h) e il ENT4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SLC29A4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ENT4 Antibody (SA-18): sc-101295
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ENT4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405115-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ENT4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405115-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano SLC29A4 codifica per il trasportatore equilibrativo di nucleosidi 4 (ENT4), un membro della famiglia SLC29 che media il trasporto bidirezionale di nucleosidi e di cationi organici correlati attraverso le membrane cellulari secondo gradienti di concentrazione. L’attività di ENT4 contribuisce alla via di recupero (salvage) dei nucleosidi e al metabolismo delle purine, influenzando i pool intracellulari di nucleotidi e collegando così il trasporto di membrana alla sintesi di DNA/RNA e, più in generale, all’omeostasi metabolica. Il trasporto mediato da ENT4 è sensibile alle condizioni extracellulari e può intersecarsi con le risposte cellulari allo stress che rimodellano la domanda di nucleotidi e la segnalazione. Alterazioni della funzione di SLC29A4/ENT4 sono state investigate nel contesto di una gestione disregolata dei nucleosidi e di fenotipi guidati dai metaboliti, rilevanti per la ricerca sulle malattie neurologiche e metaboliche.
ENT4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC29A4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC29A4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC29A4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC29A4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.