ENHO CRISPR Activation Plasmid (h): sc-418381-ACT

ENHO kodiert das Peptidhormon Adropin, einen sezernierten Faktor, der an der systemischen Energiehomöostase und der kardiometabolischen Regulation beteiligt ist. Die ENHO-Expression wurde mit Nährstoffsensorik und metabolischer Anpassung in Verbindung gebracht und beeinflusst die Nutzung von Glukose und Lipiden sowie Signalprogramme, die den Leberstoffwechsel, die Gefäßfunktion und die Physiologie der Skelettmuskulatur koordinieren. In zellulären Modellen überschneiden sich adropinassoziierte Effekte mit Signalwegen, die die Mitochondrienfunktion, oxidative Stressantworten und endotheliale Signalübertragung steuern, was ENHO zu einem hilfreichen Knotenpunkt für die Untersuchung metabolischer Umprogrammierung macht. Veränderte ENHO-/Adropin-Spiegel wurden in Zusammenhängen berichtet, die für Adipositas, Insulinresistenz, Fettlebererkrankung und kardiovaskuläre Dysfunktion relevant sind, was seine Bedeutung für mechanistische Forschung unterstreicht, ohne daraus klinische Schlussfolgerungen abzuleiten.

ENHO Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ENHO-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ENHO Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ENHO-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ENHO-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ENHO-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ENHO-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ENHO-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ENHO-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ENHO-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.