Endoglin/CD105 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400599-LAC

ENG kodiert Endoglin (CD105), einen transmembranen Korezeptor für Liganden der TGF-β-Superfamilie, der die Signalübertragung über ALK1/ALK5 sowie die nachgeschalteten SMAD1/5/8- und SMAD2/3-Signalwege moduliert. Endoglin wird stark auf proliferierenden Endothelzellen exprimiert und reguliert angiogene Antworten, die Proliferation und Migration von Endothelzellen sowie den Umbau der extrazellulären Matrix. Durch die Ausbalancierung der BMP9/10–TGF-β-Signalgebung beeinflusst ENG die Gefäßentwicklung, entzündungsassoziiertes vaskuläres Remodeling und die Dynamik der Zell-Zell-Adhäsion. Eine veränderte ENG-Expression oder -Funktion wird in Forschungskontexten zur Biologie vaskulärer Malformationen, zu endothelialer Dysfunktion und zur tumorassoziierten Angiogenese mitbetrachtet und bietet einen mechanistischen Ansatzpunkt zur Aufschlüsselung dieser Signalwege.

Endoglin/CD105 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ENG-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Endoglin/CD105 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ENG-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Endoglin/CD105-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ENG-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.