Plasmide CRISPR d'Activation (h) Endoglin/CD105: sc-400599-ACT

ENG code l’endogline (CD105), une glycoprotéine transmembranaire homodimérique qui agit comme récepteur auxiliaire au sein du complexe de récepteurs de la superfamille du TGF-β. Elle module la signalisation dépendante des SMAD en aval de ligands tels que le TGF-β et les BMP, influençant la prolifération et la migration des cellules endothéliales ainsi que le remodelage de la matrice extracellulaire lors de l’angiogenèse et du maintien de l’homéostasie vasculaire. L’endogline est fortement exprimée par l’endothélium activé et dans certains compartiments stromaux, ce qui l’associe à des processus tels que le développement vasculaire, le remodelage lié à l’inflammation et la signalisation induite par l’hypoxie. Une expression ou une fonction dérégulée d’ENG est impliquée dans la biologie des malformations vasculaires et la néovascularisation aberrante observée dans de multiples contextes pathologiques.

Endoglin/CD105 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ENG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Endoglin/CD105 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ENG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ENG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Endoglin/CD105. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ENG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Endoglin/CD105 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Endoglin/CD105 dans les cellules tumorales présentant une expression de ENG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.