Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ENDOG Plasmide Double Nickase (h): sc-403263-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ENDOG Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ENDOG Double Nickase Plasmid (h) e il ENDOG Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ENDOG. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ENDOG Antibody (B-2): sc-365359
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ENDOG Plasmide Double Nickase (h) | sc-403263-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ENDOG Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403263-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ENDOG codifica l’endonucleasi G, una nucleasi localizzata nei mitocondri che partecipa al metabolismo del DNA mitocondriale e può contribuire alla frammentazione del DNA nucleare in condizioni di stress cellulare. La proteina è stata collegata a processi legati all’apoptosi intrinseca e all’omeostasi mitocondriale, interfacciandosi con vie che regolano le risposte allo stress ossidativo e l’integrità del genoma. Alterazioni dell’attività di ENDOG sono state associate a fenotipi che coinvolgono disfunzione mitocondriale e sensibilità al danno del DNA, rendendola rilevante per studi sullo stress metabolico e sulla regolazione della morte cellulare. In quanto nucleasi conservata, ENDOG è anche utilizzata come fattore modello per analizzare la segnalazione mitocondrio–nucleo durante la degradazione della cromatina indotta dallo stress.
ENDOG Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ENDOG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ENDOG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ENDOG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ENDOG interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.