Plasmide CRISPR d'Activation (h) ENA-78: sc-405834-ACT

CXCL5 code le peptide épithélial activateur des neutrophiles 78 (ENA-78), une chimiokine CXC qui signale principalement via CXCR2 afin de favoriser la chimiotaxie, l’adhésion et l’activation des neutrophiles. ENA-78 contribue à des cascades de signalisation inflammatoires qui croisent les programmes transcriptionnels régulés par NF-κB et les MAPK, modulant ainsi le recrutement des leucocytes et le remodelage tissulaire. Une expression dérégulée de CXCL5 a été associée à des microenvironnements inflammatoires chroniques et à une altération du dialogue entre stroma et système immunitaire dans des maladies où l’infiltration de neutrophiles et les signaux angiogéniques sont marqués. En tant que médiateur sécrété, ENA-78 est également utilisé comme indicateur de la dynamique des réseaux de cytokines et de la signalisation paracrine dans des modèles de cellules épithéliales, endothéliales et myéloïdes.

ENA-78 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CXCL5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ENA-78 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CXCL5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CXCL5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ENA-78. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CXCL5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ENA-78 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ENA-78 dans les cellules tumorales présentant une expression de CXCL5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.