EN2/Engrailed 2 Double Nickase Plasmid (h): sc-403598-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EN2/Engrailed 2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EN2/Engrailed 2 Double-Nickase-Plasmid (h) und EN2/Engrailed 2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EN2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: EN2/Engrailed 2: sc-293311
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EN2/Engrailed 2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403598-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EN2/Engrailed 2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403598-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EN2 (Engrailed 2) ist ein Homeobox-enthaltender Transkriptionsfaktor, der während der menschlichen Entwicklung die räumliche Musterbildung und die neuronale Differenzierung reguliert, mit ausgeprägten Funktionen bei der Spezifikation des Mittelhirn–Hinterhirn-Grenzbereichs und der Ausbildung zerebellärer Schaltkreise. Durch die Bindung an DNA über seine Homeodomäne koordiniert EN2 Genexpressionsprogramme, die Zellschicksalsentscheidungen, Axonführung und synaptische Organisation beeinflussen. Die EN2-Aktivität ist in entwicklungsbiologische Signalnetzwerke wie WNT, FGF und SHH eingebunden, um regionale Identität und das Timing der Neurogenese zu verfeinern. Eine fehlregulierte EN2-Expression oder ein veränderter regulatorischer Kontext wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht und wird häufig in Studien zur Spezifikation neuraler Zelllinien und zur Stabilität transkriptioneller Netzwerke untersucht.
EN2/Engrailed 2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EN2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EN2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EN2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EN2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.