Emx2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403570-ACT

EMX2 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor Emx2, einen nukleären Regulator, der embryonale Gewebe strukturiert und die regionale Identität im sich entwickelnden zerebralen Kortex steuert. In menschlichen Zellen trägt EMX2 zu transkriptionellen Netzwerken bei, die die Proliferation von Vorläuferzellen, die neuronale Differenzierung und die Gewebemorphogenese kontrollieren, und ist dabei in übergeordnete entwicklungsbiologische Signalprogramme wie Wnt/β-Catenin sowie verwandte chromatinregulatorische Signalwege eingebunden. Eine veränderte EMX2-Expression oder Störungen seiner Regulation wurden mit neuroentwicklungsbedingten Auffälligkeiten in Verbindung gebracht und in mehreren Tumorkontexten als fehlreguliert beschrieben, in denen Zellschicksalskontrolle und Differenzierungszustand gestört sind. Diese Eigenschaften machen EMX2 zu einem geeigneten Knotenpunkt, um die transkriptionelle Kontrolle der Linienfestlegung, zelluläre Plastizität und krankheitsassoziierte genregulatorische Schaltkreise zu untersuchen.

Emx2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen EMX2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Emx2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des EMX2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der EMX2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Emx2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native EMX2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Emx2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Emx2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem EMX2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.